단백질을 가지고 실험을 하는 것은 DNA work보다 훨씬 더 힘듭니다. 단백질을 순수 정제하는 것은 정말 노가다(?)에 가깝죠. 그래서 많은 이들이 어떻게든 정제를 쉽게 해보기 위해 만들어낸 것이 affinity tag 입니다. 가장 대표적인 것이 6xHis-tag이고 MBP (maltose binding protein), GST, CBP (chitin binding protein) 등등 여러가지가 있습니다. 하지만 이런 tag이나 커다란 단백질이 붙어있으면 여러가지로 방해가 되기 때문에 이 tag을 제거하는 방법들이 고안되었습니다. 아래는 tag 제거에 사용되는 단백질 분해효소들입니다.

제 개인적으로는 TEV protease가 제일 좋더군요. Thrombin이나 PreScission은 좀 문제가 있었고, 최근에 나온 HRV 3C나 TagZyme은 사용해 보지 못했습니다. 그런데 Invitrogen에서 파는 TEV는 생각보다 별로였습니다. TEV protease는 원래 stability가 매우 낮은데 invitrogen의 것도 그렇게 좋지 못한 것 같습니다. 그냥 이거 개발한 사람에게 클론을 보내달라고 하면 보내줍니다. ^^

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(위 그림은 인비트로젠의 브로셔 사진)

하지만 아래의 효소들은 다 나름대로 특징이 있습니다. 예를 들어 TEV나 HRV 3C는 효소 자체에 His-tag이 붙어있어서 His-tag 제거에는 최고입니다. His-tag가 제거된 단백질과 분리가 자연스럽게 되니까요.

Qiagen의 신제품 TagZyme은 N-말단부터 2개의 펩타이드를 자릅니다. 그러니까 N-terminal His-tag 제거에만 사용가능하고 His-tag 이후 몇개의 아미노산이 더 잘려나갈 수도 있습니다.

아래는 각 효소들과 간단한 특징입니다. 링크를 따라가시면 각 회사의 카탈로그나 제품 정보를 보실 수 있습니다.

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Posted by 바이오매니아


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